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常用的剛果紅染色法有兩種
更新時間:2022-08-22   點擊次數(shù):1393次
   剛果紅染色法特指用剛果紅將纖維素染色的方法。剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復合物,常用的剛果紅染色法有兩種。
  含義
  剛果紅染色法特指纖維素的染色法,剛果紅能把纖維素染成紅色復合物,對纖維二糖和葡萄糖無作用,可用此來鑒別纖維素或纖維素分解菌的分解作用
  原理
  剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復合物。當纖維素被纖維素酶分解后,剛果紅——纖維素的復合物便沒法形成,培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈,通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌
  常用的剛果紅染色法有兩種:
  方法一,先培養(yǎng)微生物,再加入剛果紅進行顏色反應
  在長出菌落的培養(yǎng)基上,覆蓋質(zhì)量濃度為1 mg/mI。的CR溶液,10~15 min后,倒去CR溶液,加入物質(zhì)的量濃度為l mol/l的NaCI溶液,15 min后倒掉NaCl溶液,此時,產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍將會出現(xiàn)透明圈。
 ?。覰aCl的原因:剛果紅是結合到培養(yǎng)基的多糖底物,但分解纖維素的細菌可以產(chǎn)纖維素酶,能分解這個多糖底物成為寡糖,這樣剛果紅就不能結合上去了,氯化鈉就可以使結合不牢的剛果紅洗去,這樣就留下大小不一的透明圈,大的透明圈分解纖維素的能力就強)
  方法二,在倒平板時就加入剛果紅
  配制質(zhì)量濃度為10 mg/mI的CR溶液,滅菌后,按照每200 mI。培養(yǎng)基加入1 mI。的比例加入CR溶液,混勻后倒平板。等培養(yǎng)基上長出茵落后,產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍將會出現(xiàn)明顯的透明圈
  兩種剛果紅染色法的比較 : 剛果紅在篩選纖維素分解菌上的應用已經(jīng)有超過20年的歷史,課本中給出了兩種方法。
  方法一是傳統(tǒng)的方法,
  優(yōu)點:這樣顯示出的顏色反應基本上是纖維素分解菌的作用。
  缺點:操作繁瑣,加入剛果紅溶液會使菌落之間發(fā)生混雜;
  方法二
  優(yōu)點:操作簡便,不存在菌落混雜問題,
  缺點1:由于在纖維素粉和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì),可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊,因為培養(yǎng)基中纖維素占主要地位,因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分。
  缺點2:有些微生物具有降解色素的能力,它們在長時間培養(yǎng)過程中會降解剛果紅而形成明顯的透明圈,與纖維素分解菌不易區(qū)分
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