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革蘭氏染色液

更新時間:2024-09-26

簡要描述:

革蘭氏染色液是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法,1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立。未經(jīng)染色之細菌,由于其與周圍環(huán)境折光率差別甚小,故在顯微鏡下極難觀察。染色后細菌與環(huán)境形成鮮明對比,可以清楚地觀察到細菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征,而用以分類鑒定。革蘭氏染色屬復染法

革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法,1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立。未經(jīng)染色之細菌,由于其與周圍環(huán)境折光率差別甚小,故在顯微鏡下極難觀察。染色后細菌與環(huán)境形成鮮明對比,可以清楚地觀察到細菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征,而用以分類鑒定。革蘭氏染色屬復染法。

革蘭氏染色液原理:

通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后,在細胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復合物,革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密,故遇乙醇或丙酮脫色處理時,因失水反而使網(wǎng)孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現(xiàn)縫隙,因此能把結(jié)晶紫與碘復合物牢牢留在壁內(nèi),使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差,在遇脫色劑后,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復合物的溶出,因此通過乙醇脫色后仍呈無色,再經(jīng)沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色。染色的差異主要是由于陰性與陽性細菌細胞壁的差異所引起的。

革蘭氏染色液材料:

1.葡萄球菌和大腸桿菌混合菌液。

2.結(jié)晶紫染色液

3.革蘭氏碘液

4.95%酒精。

5.番紅染液

6.載玻片方法、涂片標本的制備(見實驗一)

革蘭氏染色法1.初染:在上述已固定的涂片上,滴加結(jié)晶紫染液,染色1分鐘,水洗。

2.媒染:滴加革蘭氏碘液,作用1-3分鐘,水洗3.脫色:滴加95%酒精,并頻頻搖動玻片,至無紫色脫出為止(約20秒),水洗復染:加番紅染液,復染半分鐘,水洗,用吸水紙印干后,油鏡檢查結(jié)果:視野中可以察見兩種細菌葡萄球菌:紫色、球形、葡萄狀排列。

大腸桿菌:紅色、桿狀、散在排列。


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